凝膠成像儀選擇技巧，新手必備！
發(fā)布時(shí)間：2018-10-08 閱讀：1553次
市場(chǎng)上各品牌、各型號(hào)的凝膠成像儀林林種種，質(zhì)量參差不齊，價(jià)格各異，如何選擇一款適合自己的凝膠成像儀就顯得尤為重要，以下是凝膠成像儀選擇技巧，新手必備！
1、看參數(shù)
當(dāng)然有DEMO機(jī)的，這條可以忽略。
我們對(duì)比不同廠商的參數(shù)時(shí)一定要注意只比關(guān)鍵的，而對(duì)那些無關(guān)痛癢的參數(shù)則大可以視而不見。
對(duì)于掃描成像而言，靈敏度一般不是問題，我們關(guān)注的應(yīng)該是分辨率，當(dāng)然分辨率只要達(dá)到我們的要求即可，對(duì)于小型的凝膠、膜和微孔板來說，一般分辨率在25um左右應(yīng)該是足夠了。在滿足分辨率后，一個(gè)重要的參數(shù)擺在我們的面前，那就是動(dòng)態(tài)范圍，簡(jiǎn)單的說，動(dòng)態(tài)范圍決定著你能否同時(shí)在一張膠上同時(shí)看到強(qiáng)的信號(hào)和弱的信號(hào)，而且他們之間保持比較好的定量關(guān)系。一般動(dòng)態(tài)范圍采用數(shù)量級(jí)來表示，這個(gè)數(shù)越大，表明動(dòng)態(tài)范圍越寬。
對(duì)于激光掃描成像系統(tǒng)，情況就復(fù)雜一些。從激光器、濾光片到分光鏡和檢測(cè)器還有好多需要考慮和比較的。
下面主要介紹實(shí)驗(yàn)室常用的凝聚成像儀的參數(shù)選擇。根據(jù)原則一，如果您主要用它來拍普通核酸膠或蛋白膠，那么幾乎市場(chǎng)上所有的成像儀都可以很好的滿足您的需求，這時(shí)除了價(jià)格這個(gè)決定因素外，能比較的也就是一些諸如“操作是否簡(jiǎn)便、外形是否時(shí)尚”等無關(guān)痛癢的指標(biāo)了。真正需要花心思考察的可能就是準(zhǔn)備做化學(xué)發(fā)光的用戶，他們對(duì)敏感度要求高，同時(shí)還要求比較寬的動(dòng)態(tài)范圍。
要想捕獲到微弱的化學(xué)發(fā)光，需要上佳的CCD相機(jī)和鏡頭。一般來說，CCD相機(jī)的冷卻溫度和背景噪音息息相關(guān)，溫度越低，噪音就越低。因此，-25℃的制冷溫度是對(duì)相機(jī)的基本要求（低的溫度，噪音降低效果不明顯，而量子效率又會(huì)受很大影響）；另外，較大的像素能夠提供高的捕光效率；所以對(duì)于相同大小的CCD芯片，需要注意像素的尺寸。鏡頭的參數(shù)就簡(jiǎn)單了，由于我們只需要觀察近距離的樣品而且一般可以調(diào)整樣品位置（有些廠家甚至提供電動(dòng)樣品升降平臺(tái)），所以基本無需選擇長(zhǎng)鏡頭或者變焦鏡頭；但是，由于我們需要檢測(cè)微弱的化學(xué)發(fā)光，鏡頭的光圈則至關(guān)重要，一般F值越小，其通光量越大，而且成平方反比關(guān)系，因此我們一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭。另外，如果鏡頭是電動(dòng)的，我們可以省卻打開機(jī)箱，反復(fù)手工調(diào)整光圈和聚焦等的煩惱。
其他我們需要考慮的包括光源、濾光片和暗箱等部件。光源的種類和發(fā)光的均一度，濾光片的數(shù)量和暗箱的遮光效果等均在我們的考慮范圍之內(nèi)。當(dāng)然，一般如果成像儀的CCD和鏡頭配置不錯(cuò)，一般這些部件也不會(huì)太差。
2、看自己的用途
市場(chǎng)上各品牌、各型號(hào)的成像儀林林種種，但是從成像原理上可以分成兩大類，分別是拍照成像和掃描成像。
拍照成像簡(jiǎn)單說就是樣品和相機(jī)的相對(duì)位置不動(dòng)，可以進(jìn)行單次成像或多次成像；
掃描成像則是相機(jī)對(duì)樣品進(jìn)行局部成像，然后通過樣品或相機(jī)的移動(dòng)對(duì)整個(gè)樣品進(jìn)行成像。
拍照成像目前主要采用CCD相機(jī)成像，由于可以設(shè)置不同的曝光時(shí)間，常被用來進(jìn)行微弱的化學(xué)發(fā)光及生物發(fā)光的成像。
而掃描成像則由于精度高、重復(fù)性好被廣泛用于大型樣品以及多通道成像中。可以說，對(duì)于大型樣品或多通道應(yīng)用，能選擇掃描成像的，盡量不要選擇拍照成像。
原理搞清楚了，選擇起來就簡(jiǎn)單了。不同的原理導(dǎo)致了不同應(yīng)用的佳選擇，所以千萬不要相信什么“全能王”之類的鬼話，沒有任何一款機(jī)器可以通吃所有應(yīng)用領(lǐng)域。下面就實(shí)驗(yàn)室常見的一些應(yīng)用簡(jiǎn)單的說明選擇的依據(jù)：
（1）核酸電泳凝膠：
一般此類凝膠都采用EB染色、紫外激發(fā)，而且凝膠較小。推薦采用一般的凝膠成像設(shè)備即可完成。
（2）蛋白電泳凝膠：
一般此類凝膠采用考染或銀染，白光透射成像。對(duì)于小型凝膠您可以選擇一般的凝膠成像設(shè)備，但是對(duì)于大型凝膠，特別是雙向電泳凝膠，由于CCD拍照成像會(huì)有幾何扭曲，而且透鏡效應(yīng)也會(huì)導(dǎo)致不同區(qū)域的信號(hào)強(qiáng)度差異，另外CCD拍照也無法保證不同凝膠的成像參數(shù)保持一致，因此掃描成像是好選擇。
（3）轉(zhuǎn)印膜：
這個(gè)稍微有些復(fù)雜。一般轉(zhuǎn)印膜有比色法顯色、同位素、化學(xué)發(fā)光和熒光等不同檢測(cè)手段。
比色法顯色就是產(chǎn)生有顏色的條帶或斑點(diǎn)，一般采用普通的凝膠成像設(shè)備即可。
同位素可以采用壓膠片曝光的方法，但是費(fèi)時(shí)、費(fèi)力而且容易過飽和。
比較通用的方法是由FujiFilm在1981年的磷屏成像技術(shù)，獲得信號(hào)潛影的磷屏通過激光掃描就可以獲取同位素的信號(hào)。而化學(xué)發(fā)光是目前常用的蛋白印跡的檢測(cè)手段，無疑，冷CCD拍照成像對(duì)這種微弱的光信號(hào)是合適的。
熒光是所有這些檢測(cè)手段 中令人贊嘆的和有前景的。這不僅僅是因?yàn)闊晒馊玖暇哂袑挼膭?dòng)態(tài)范圍，而且還在于它能夠?yàn)槲覀兲峁┒嗤返臋z測(cè)途徑（同樣適用于凝膠）。當(dāng)然，您可以使用單一熒光檢測(cè)，這時(shí)您對(duì)凝膠成像設(shè)備的要求就包括了新的激光光源和相應(yīng)的濾光片。如果您是一個(gè)主義者，或者您需要對(duì)鄰近或重疊的目標(biāo)分子進(jìn)行成像，那么多通道熒光檢測(cè)是您的不二之選。這時(shí)掃描成像是佳選擇，這樣選擇不僅僅是因?yàn)閽呙璩上衲軌驇砀叩撵`敏度和分辨率，重要的是，不同通道 之間沒有幾何扭曲，擬合性好。
微孔板及其他特殊需求：對(duì)于拍照成像而言，由于幾何扭曲的問題，對(duì)微孔板成像就變得比較復(fù)雜了，一般必須一個(gè)專用的校正裝置才可完成。當(dāng)然，如果采用掃描成像一般不需要任何額外 附件。很多實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在都對(duì)小動(dòng)物成像非常感興趣，然而對(duì)小動(dòng)物進(jìn)行真的不是一件簡(jiǎn)單的事，一方面小動(dòng)物需要進(jìn)行麻醉和固定；另一方面還需要對(duì)信號(hào)位置進(jìn)行三維定位。因此，能同時(shí)提供功能、代謝和解剖圖像的PET/CT是進(jìn)行這類成像的有力的工具。
3、看研究類似的同行
好用才是硬道理。任憑你說得天花亂墜，拿來我試試，不就什么都清楚了。現(xiàn)在多數(shù)廠商都提供Demo機(jī)服務(wù)，還有技術(shù)人員現(xiàn)場(chǎng)答疑解惑，那就請(qǐng)各位上場(chǎng)，真刀真槍的拼一下，誰的性能好，價(jià)格優(yōu)，那我就要誰的。
當(dāng)然，我們的實(shí)際測(cè)試結(jié)果僅僅是針對(duì)我們自己的樣品和現(xiàn)場(chǎng)demo的機(jī)器而已。我們不能據(jù)此對(duì)相關(guān)品牌和相關(guān)型號(hào)做太多評(píng)判。由于具體應(yīng)用的限制、操作技巧的差異以及可能的儀器狀態(tài)的區(qū)別，我們有可能沒有給出公允的評(píng)價(jià)。但無論如何，這些訊息對(duì)我們采購者和使用者來說都是非常重要的。
4、看售后
很多用戶認(rèn)為，買來后擺在實(shí)驗(yàn)室使用的只是一臺(tái)儀器而已。其實(shí)，事實(shí)遠(yuǎn)不是這樣。買儀器來是為了使用，而能否用好，除了我們自己的聰明才智和勤學(xué)苦練之外，廠家的技術(shù)支持必不可少。因此，要買就買原廠貨已經(jīng)成為很多用戶的共識(shí)，因?yàn)檫@樣就可以享受到廠家現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)支持和指導(dǎo)。
1、看參數(shù)
當(dāng)然有DEMO機(jī)的，這條可以忽略。
我們對(duì)比不同廠商的參數(shù)時(shí)一定要注意只比關(guān)鍵的，而對(duì)那些無關(guān)痛癢的參數(shù)則大可以視而不見。
對(duì)于掃描成像而言，靈敏度一般不是問題，我們關(guān)注的應(yīng)該是分辨率，當(dāng)然分辨率只要達(dá)到我們的要求即可，對(duì)于小型的凝膠、膜和微孔板來說，一般分辨率在25um左右應(yīng)該是足夠了。在滿足分辨率后，一個(gè)重要的參數(shù)擺在我們的面前，那就是動(dòng)態(tài)范圍，簡(jiǎn)單的說，動(dòng)態(tài)范圍決定著你能否同時(shí)在一張膠上同時(shí)看到強(qiáng)的信號(hào)和弱的信號(hào)，而且他們之間保持比較好的定量關(guān)系。一般動(dòng)態(tài)范圍采用數(shù)量級(jí)來表示，這個(gè)數(shù)越大，表明動(dòng)態(tài)范圍越寬。
對(duì)于激光掃描成像系統(tǒng)，情況就復(fù)雜一些。從激光器、濾光片到分光鏡和檢測(cè)器還有好多需要考慮和比較的。
下面主要介紹實(shí)驗(yàn)室常用的凝聚成像儀的參數(shù)選擇。根據(jù)原則一，如果您主要用它來拍普通核酸膠或蛋白膠，那么幾乎市場(chǎng)上所有的成像儀都可以很好的滿足您的需求，這時(shí)除了價(jià)格這個(gè)決定因素外，能比較的也就是一些諸如“操作是否簡(jiǎn)便、外形是否時(shí)尚”等無關(guān)痛癢的指標(biāo)了。真正需要花心思考察的可能就是準(zhǔn)備做化學(xué)發(fā)光的用戶，他們對(duì)敏感度要求高，同時(shí)還要求比較寬的動(dòng)態(tài)范圍。
要想捕獲到微弱的化學(xué)發(fā)光，需要上佳的CCD相機(jī)和鏡頭。一般來說，CCD相機(jī)的冷卻溫度和背景噪音息息相關(guān)，溫度越低，噪音就越低。因此，-25℃的制冷溫度是對(duì)相機(jī)的基本要求（低的溫度，噪音降低效果不明顯，而量子效率又會(huì)受很大影響）；另外，較大的像素能夠提供高的捕光效率；所以對(duì)于相同大小的CCD芯片，需要注意像素的尺寸。鏡頭的參數(shù)就簡(jiǎn)單了，由于我們只需要觀察近距離的樣品而且一般可以調(diào)整樣品位置（有些廠家甚至提供電動(dòng)樣品升降平臺(tái)），所以基本無需選擇長(zhǎng)鏡頭或者變焦鏡頭；但是，由于我們需要檢測(cè)微弱的化學(xué)發(fā)光，鏡頭的光圈則至關(guān)重要，一般F值越小，其通光量越大，而且成平方反比關(guān)系，因此我們一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭。另外，如果鏡頭是電動(dòng)的，我們可以省卻打開機(jī)箱，反復(fù)手工調(diào)整光圈和聚焦等的煩惱。
其他我們需要考慮的包括光源、濾光片和暗箱等部件。光源的種類和發(fā)光的均一度，濾光片的數(shù)量和暗箱的遮光效果等均在我們的考慮范圍之內(nèi)。當(dāng)然，一般如果成像儀的CCD和鏡頭配置不錯(cuò)，一般這些部件也不會(huì)太差。
2、看自己的用途
市場(chǎng)上各品牌、各型號(hào)的成像儀林林種種，但是從成像原理上可以分成兩大類，分別是拍照成像和掃描成像。
拍照成像簡(jiǎn)單說就是樣品和相機(jī)的相對(duì)位置不動(dòng)，可以進(jìn)行單次成像或多次成像；
掃描成像則是相機(jī)對(duì)樣品進(jìn)行局部成像，然后通過樣品或相機(jī)的移動(dòng)對(duì)整個(gè)樣品進(jìn)行成像。
拍照成像目前主要采用CCD相機(jī)成像，由于可以設(shè)置不同的曝光時(shí)間，常被用來進(jìn)行微弱的化學(xué)發(fā)光及生物發(fā)光的成像。
而掃描成像則由于精度高、重復(fù)性好被廣泛用于大型樣品以及多通道成像中。可以說，對(duì)于大型樣品或多通道應(yīng)用，能選擇掃描成像的，盡量不要選擇拍照成像。
原理搞清楚了，選擇起來就簡(jiǎn)單了。不同的原理導(dǎo)致了不同應(yīng)用的佳選擇，所以千萬不要相信什么“全能王”之類的鬼話，沒有任何一款機(jī)器可以通吃所有應(yīng)用領(lǐng)域。下面就實(shí)驗(yàn)室常見的一些應(yīng)用簡(jiǎn)單的說明選擇的依據(jù)：
（1）核酸電泳凝膠：
一般此類凝膠都采用EB染色、紫外激發(fā)，而且凝膠較小。推薦采用一般的凝膠成像設(shè)備即可完成。
（2）蛋白電泳凝膠：
一般此類凝膠采用考染或銀染，白光透射成像。對(duì)于小型凝膠您可以選擇一般的凝膠成像設(shè)備，但是對(duì)于大型凝膠，特別是雙向電泳凝膠，由于CCD拍照成像會(huì)有幾何扭曲，而且透鏡效應(yīng)也會(huì)導(dǎo)致不同區(qū)域的信號(hào)強(qiáng)度差異，另外CCD拍照也無法保證不同凝膠的成像參數(shù)保持一致，因此掃描成像是好選擇。
（3）轉(zhuǎn)印膜：
這個(gè)稍微有些復(fù)雜。一般轉(zhuǎn)印膜有比色法顯色、同位素、化學(xué)發(fā)光和熒光等不同檢測(cè)手段。
比色法顯色就是產(chǎn)生有顏色的條帶或斑點(diǎn)，一般采用普通的凝膠成像設(shè)備即可。
同位素可以采用壓膠片曝光的方法，但是費(fèi)時(shí)、費(fèi)力而且容易過飽和。
比較通用的方法是由FujiFilm在1981年的磷屏成像技術(shù)，獲得信號(hào)潛影的磷屏通過激光掃描就可以獲取同位素的信號(hào)。而化學(xué)發(fā)光是目前常用的蛋白印跡的檢測(cè)手段，無疑，冷CCD拍照成像對(duì)這種微弱的光信號(hào)是合適的。
熒光是所有這些檢測(cè)手段 中令人贊嘆的和有前景的。這不僅僅是因?yàn)闊晒馊玖暇哂袑挼膭?dòng)態(tài)范圍，而且還在于它能夠?yàn)槲覀兲峁┒嗤返臋z測(cè)途徑（同樣適用于凝膠）。當(dāng)然，您可以使用單一熒光檢測(cè)，這時(shí)您對(duì)凝膠成像設(shè)備的要求就包括了新的激光光源和相應(yīng)的濾光片。如果您是一個(gè)主義者，或者您需要對(duì)鄰近或重疊的目標(biāo)分子進(jìn)行成像，那么多通道熒光檢測(cè)是您的不二之選。這時(shí)掃描成像是佳選擇，這樣選擇不僅僅是因?yàn)閽呙璩上衲軌驇砀叩撵`敏度和分辨率，重要的是，不同通道 之間沒有幾何扭曲，擬合性好。
微孔板及其他特殊需求：對(duì)于拍照成像而言，由于幾何扭曲的問題，對(duì)微孔板成像就變得比較復(fù)雜了，一般必須一個(gè)專用的校正裝置才可完成。當(dāng)然，如果采用掃描成像一般不需要任何額外 附件。很多實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在都對(duì)小動(dòng)物成像非常感興趣，然而對(duì)小動(dòng)物進(jìn)行真的不是一件簡(jiǎn)單的事，一方面小動(dòng)物需要進(jìn)行麻醉和固定；另一方面還需要對(duì)信號(hào)位置進(jìn)行三維定位。因此，能同時(shí)提供功能、代謝和解剖圖像的PET/CT是進(jìn)行這類成像的有力的工具。
3、看研究類似的同行
好用才是硬道理。任憑你說得天花亂墜，拿來我試試，不就什么都清楚了。現(xiàn)在多數(shù)廠商都提供Demo機(jī)服務(wù)，還有技術(shù)人員現(xiàn)場(chǎng)答疑解惑，那就請(qǐng)各位上場(chǎng)，真刀真槍的拼一下，誰的性能好，價(jià)格優(yōu)，那我就要誰的。
當(dāng)然，我們的實(shí)際測(cè)試結(jié)果僅僅是針對(duì)我們自己的樣品和現(xiàn)場(chǎng)demo的機(jī)器而已。我們不能據(jù)此對(duì)相關(guān)品牌和相關(guān)型號(hào)做太多評(píng)判。由于具體應(yīng)用的限制、操作技巧的差異以及可能的儀器狀態(tài)的區(qū)別，我們有可能沒有給出公允的評(píng)價(jià)。但無論如何，這些訊息對(duì)我們采購者和使用者來說都是非常重要的。
4、看售后
很多用戶認(rèn)為，買來后擺在實(shí)驗(yàn)室使用的只是一臺(tái)儀器而已。其實(shí)，事實(shí)遠(yuǎn)不是這樣。買儀器來是為了使用，而能否用好，除了我們自己的聰明才智和勤學(xué)苦練之外，廠家的技術(shù)支持必不可少。因此，要買就買原廠貨已經(jīng)成為很多用戶的共識(shí)，因?yàn)檫@樣就可以享受到廠家現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)支持和指導(dǎo)。
